0 引言 Introduction

随着全世界社会经济的高速发展，广大人民的生活水平不断提高，人们饮食结构的不断变化，生活节奏的持续加快及多坐少动的日常习惯等诸多不利于身体健康的行为，导致全球糖尿病的患病率迅速增长。糖尿病目前已经成为了全球性的卫生问题。

糖尿病是一种与体内代谢相关的全身性疾病，患者中以2 型糖尿病为主。骨质疏松症是一种系统性的骨骼疾病，其主要以骨质量减低、骨细微结构破坏、骨强度降低及骨质风险升高为特点[1]。在临床中，糖尿病和骨质疏松症既是两种相对独立的慢性疾病，但又不可分割[2]。半个多世纪前有学者就认为糖尿病与骨质疏松有关，1948 年有学者发现糖尿病与骨量丢失、骨质疏松相关，并首次提出糖尿病骨减少的概念[3]。糖尿病性骨质疏松属于继发性骨质疏松，是糖尿病在骨骼系统中出现的最常见的一种并发症。目前，2 型糖尿病已确认是引起骨骼损伤及骨脆性增加的独立危险因素[4-7]。近年来，国内外的调查结果显示糖尿病性骨质疏松的发病率约占糖尿病患者的50%以上[8-9]，国内李贵英等[9]报告能占55.9%，其发病率远远高于其他并发症，且有逐年增高趋势。糖尿病性骨质疏松的发病率呈逐年上升趋势，其高致残率明显降低患者的生活质量，同时也带来极大的社会经济负担[10-11]。

动物模型的建立对进一步明确糖尿病性骨质疏松症的特点及机制的深入研究具有重大意义。对于大鼠糖尿病性骨质疏松症模型的建立，目前尚未有统一的标准建模方法，并且对建造的模型未进行深入的相关鉴定研究。因此，此次实验旨在通过建造大鼠糖尿病性骨质疏松模型，并对该模型进行相关鉴定，为后期进一步明确糖尿病性骨质疏松症的特点及机制的深入研究奠定基础，同时也为糖尿病性骨质疏松症患者的骨组织工程研究奠定相关的实验基础。

1 材料和方法 Materials and methods

1.1 设计 建立动物模型。

1.2 时间及地点 实验于2019 年1 至10 月在西南医科大学口腔医学院口颌面修复重建与再生实验室完成。

1.3 材料1.3.1 实验动物 7周龄雄性SD大鼠32只，体质量(238±12) g，购于西南医科大学基础医学部实验动物中心，动物许可证号：SCXK(川)2018-17。大鼠自由摄食、摄水，饲养室室温(22±2)℃，湿度48%，昼夜12 h。

1.3.2 实验用主要饲料、药品、试剂和仪器 高脂高糖饲料[开源动物饲料(常州)有限公司]；链脲佐菌素(美国 Sigma公司)；柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液 ( 美国雅培公司)；苏木精-伊红(北京索莱宝科技有限公司产品)；血糖仪及血糖试纸(德国罗氏诊断公司)；电子天平(上海速展计量仪器有限公司)；光学显微镜(Olympus BX51，日本)；石蜡切片机(Leica，德国)；Micro-CT(Scanco viva40，瑞士)。

1.4 实验方法

1.4.1 实验分组 将32 只大鼠测量体质量，根据体质量采用随机数字表法随机分为模型组与对照组，每组16 只，每组大鼠随机分为4 笼，每笼各4 只。

1.4.2 建立大鼠2 型糖尿病性骨质疏松模型 模型组给予高脂高糖饲料，对照组给予普通饲料，喂养4 周。

(1)配制链脲佐菌素(STZ)：首先配置0.1 mmol/L 柠檬酸缓冲液：将柠檬酸与柠檬酸钠分别2.0 g 与2.94 g 各溶解于100 mL 生理盐水中，使其浓度为0.1 mmol/L，各取75 mL，充分混合后测定pH 值，调节pH，保持pH 值为4.2，保存于4 ℃冰箱待用，临用前将链脲佐菌素溶解在已配置0.1 mmol/L 柠檬酸缓冲液中，形成浓度为0.3%链脲佐菌素溶液，配置后使用锡箔纸进行遮光保护。

(2)给药方式：两组大鼠均禁食12 h，模型组大鼠行一次性腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg，注射1 次)，链脲佐菌素在使用前配置，使用过程中用锡箔纸进行遮光保护。对照组给予柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(10 mL/kg)一次性腹腔注射。注射后将大鼠放置回原笼中正常饲养，适宜条件下(室温20-25 ℃、相对湿度60%-80%)自由饮水、摄食，常规喂养(给予普通饲料)。

实验动物造模过程的相关问题造模目的： 建立大鼠2 型糖尿病性骨质疏松模型借鉴已有标准实施动物造模：高脂高糖饮食结合链脲佐菌素建立大鼠2 型糖尿病性骨质疏松模型研究问题需要改进动物模型方法及意义：快速建立一个稳定的糖尿病性骨质疏松模型对深入研究糖尿病性骨质疏松的发病机制及治疗方法至关重要。单纯给予高脂高糖饮食诱导建立糖尿病骨质疏松症症模型时间较长，费用高，成模稳定性较差动物来源及品系： 雄性SD 大鼠购于西南医科大学基础医学部实验动物中心造模技术描述： 模型组大鼠处理：(1)给予高脂高糖饲料，喂养4 周；(2)大鼠禁食12 h，行一次性腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg)，链脲佐菌素在使用前配置，使用过程中用锡箔纸进行遮光保护造模主要诱导用药： 链脲佐菌素动物数量及分组方法：根据大鼠体质量采用随机数字表法随机分为模型组和对照组，每组16 只造模成功评价指标：于注射链脲佐菌素后 3，7，10，14，21 d 测量大鼠空腹血糖，连续3 次测得空腹血糖均≥ 16.7 mmol/L，则为糖尿病造模成功[11-12]造模后实验观察指标：①两组大鼠造模前后体质量及空腹血糖水平；②胰岛组织苏木精伊红染色结果；③大鼠胫骨Micro-CT 扫描结果；④股骨组织切片分析结果造模后动物处理： 造模前及造模后3，7，10，14，21 d 空腹状态下测量大鼠体质量及血糖值；于注射链脲佐菌素8 周后，过量麻醉处死大鼠，取大鼠胰岛组织、双侧股骨及胫骨，进行相关指标检测伦理委员会批准： 实验方案经西南医科大学动物实验伦理委员会批准